Mycoprotein (Fusarium venenatum) related methods/zh

▼西安大略大学自由适用可持续技术（FAST）研究小组

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本页面概述了参与真菌蛋白（废物变食品）项目的人员可能需要用到的方法，包括培养皿和培养基的制备、高压灭菌器的使用以及简单的微生物转移技术。项目启动后，本页面将进行更新。

安全培训要求

• 皮尔斯博士安全实验室参观
• 员工健康与安全意识
• WHMIS 2015 - 工作场所危险物质信息系统
• 实验室安全与危险废物管理
• 生物安全培训

中的安全问题

个人防护装备

个人防护装备是为了保护您自身的安全，让您能够继续做自己想做的事情。

1. 安全眼镜——始终需要
2. 实验服——必须穿着
3. 可能需要手套

SDS 和其他

了解实验室中含有哪些化学品以及它们之间的相互作用，对于发生事故至关重要。

1. 相关安全数据表（SDS）应在线查看。
2. 请注意实验室门上列出的危险警示。如果您引入任何新设备或材料，必须事先向实验室门上列出的负责人报备。如果负责人信息已过期，请联系系主任更新。

使用高压灭菌器

地点：生物与地理科学楼3071室

重要提示：请确保液体只装满玻璃容器的一半！！！

手术：

在玻璃瓶/罐中制备好培养基后，用铝箔盖住。在玻璃器皿上贴上标签，注明内容物，并在铝箔“盖子”上贴上一小块高压灭菌胶带。罐子可以加盖，但如果加盖，请勿盖得太紧，否则在高压灭菌过程中可能会爆炸。将装有培养基的玻璃器皿放入高压灭菌器附近台面上的金属托盘中，向托盘中加水（水深约2.5厘米），然后小心地放入高压灭菌器中。关闭高压灭菌器并选择灭菌程序。根据每个玻璃瓶/罐的体积，可能需要不同的灭菌程序。通常，对于体积小于500毫升的容器，使用Liquid30程序，该程序大约需要1小时。灭菌完成后，打开高压灭菌器并保持打开状态几分钟。注意：小心远离高温蒸汽，以免烫伤面部！戴上耐热手套（也在高压灭菌器附近的台面上），小心地取出托盘。取出培养基，将水倒入水槽。打开高压灭菌器几分钟后，请务必将其关闭。请务必在柜台上的登记表上记录信息，并记录任何异常情况，如果一切正常，只需打勾即可。培养基上的高压灭菌胶带现在应该有黑色条纹，表明已完成高压灭菌。

干性材料（不太可能需要，但以防万一）：

与液体非常相似，但也有一些关键区别：

1. 请勿向托盘中加水
2. 使用名为 gravity 的循环（可能是 gravity20、grav 或类似名称……但不要使用液体循环）

请注意，高压灭菌器可能存在差异。务必确保您接受过相应的培训，或在懂得如何正确使用的人员的监督下进行操作。误用可能造成危险。

制备用于培养镰刀菌（Fusarium v​​enenatum）的麦芽提取物琼脂平板

为了制备用于培养毒镰孢菌（F. venenatum）菌种的麦芽琼脂平板，称取适量的麦芽提取物和琼脂，加入去离子水中。_例如，200毫升溶液需要6克麦芽提取物和3克琼脂。将上述混合物加入100毫升_去离子水中，搅拌至完全溶解，然后用去离子水补足至200毫升。_用铝箔盖住，贴上高压灭菌胶带，进行高压灭菌。灭菌完成后，待液体冷却至约50℃后再进行平板培养（液体冷却至接近室温时会凝固）。

在无菌操作台上，摆放培养皿，以便一只手可以轻松提起盖子，另一只手可以轻松倒入熔化的琼脂。倒入足够的液体，直至表面大部分被覆盖，然后盖上盖子。轻轻旋转培养皿，使液体均匀覆盖整个表面，静置直至琼脂凝固。根据无菌环境的洁净程度，可以稍微打开盖子，以避免冷凝水的产生。凝固后，用封口膜密封（可选，但有助于防止污染，尽管并非万无一失），并将培养皿倒置保存。在每个培养皿上标记培养基类型和制备日期（标记在培养皿底部，而不是盖子上）。将培养皿储存在4°C或阴凉处。

菌液体培养基的制备

为了制备用于培养毒镰孢菌（F. venenatum）的液体培养基，我们将使用麦芽提取物培养基和替代培养基。两种培养基的制备方法相同，区别在于溶解的成分（例如，麦芽提取物培养基含有麦芽提取物，而替代培养基则含有葡萄糖、硫酸镁等）。首先，称量所有成分，并将其溶解在200毫升去离子水中，置于_已贴标签的玻璃瓶中。用铝箔覆盖瓶口，并在高压灭菌前将瓶盖松松地盖上。高压灭菌后，待其冷却后，完全盖紧瓶盖。储存备用。

将F. venenatum 的生长从一个培养皿转移到另一个培养皿

在无菌条件下，打开含有毒镰孢菌菌丝体的培养皿，切取一小块琼脂。将其取出并倒置于新的麦芽琼脂平板上。将新接种的平板在室温下培养。大约4-5天后，菌丝体应该会生长。

将F. venenatum转移到小体积液体

在无菌条件下，打开含有毒镰孢菌菌丝体的培养皿，切取一块含有菌丝的琼脂。取出菌丝，将其掰成几小块，放入装有200毫升无菌培养基的培养瓶中。盖上瓶盖，在室温下培养。菌丝体需要几天时间才能生长，最好每隔几个小时摇晃一下培养瓶（或者如果有条件，可以将其放在低速摇床中培养）。

从小容量编辑过渡到大容量

只需将装有200毫升F. venenatum菌落的培养基倒入较大容量的容器中，盖上盖子，在室温下培养即可。较大容量的容器中菌落生长速度可能较慢。如果不是在摇床培养箱中培养，请确保每隔几个小时摇晃一下培养基。

根据最终目标体积，可能需要逐步增加体积。有些微生物在过大的体积中无法生长，因为体积过大会导致溶液稀释过多，因此您可能需要将 200 毫升溶液转移到 1 升溶液中，然后再将 1 升溶液转移到 5 升溶液中，以此类推。

实验概览

本研究旨在探究用于生产真菌蛋白的镰刀菌（Fusarium v​​enenatum ）能否在多种废弃培养基上生长。实验方案主要包括两部分：在麦芽琼脂培养皿上维持镰刀菌菌株，以及在多种培养基上培养镰刀菌。

维护F. venenatum种群

所需材料：在培养皿中制备麦芽提取物培养基琼脂，以及含有F. venenatum生长物的培养皿。

方法：参见上文“将毒镰刀菌（F. venenatum）从一个培养皿转移到另一个培养皿”部分。如果储存在清洁的条件下，一个培养皿中的菌株可以存活数周，但使用前务必检查是否受到污染。此方法也可用于检查用于液体培养的样本是否受到污染，因为每次打开含有毒镰刀菌的培养皿准备转移到液体培养基时，都可以同时取样进行接种。这有助于维持菌株的完整性，而且如果培养皿中出现任何意外生长，则可能是当时接种的液体培养基受到了污染。

在各种介质上培养毒蝇伞（F. venenatum）

所需材料：无菌、配制好的培养基和含有F. venenatum 的培养皿。

方法：参见上文“将毒镰孢菌转移至小体积液体培养基”部分。本部分也分为两步：先在小体积培养基（玻璃瓶）中培养，然后再转移到大体积培养基（生物反应器）中。这是因为一开始就使用大体积培养基可能不利于细菌生长，因为有些微生物无法在极低浓度的条件下生长。

先尝试麦芽提取物培养基，然后再尝试其他培养基。如果两种培养基都有效，那么就可以开始尝试各种不同的培养基了；高压锅煮过的纸板、塑料垃圾、食物垃圾都是不错的选择。

以下是有关麦芽提取物和替代介质的成分信息：

溶于蒸馏水后进行高压灭菌。对于液体培养基，请勿添加琼脂。

如有条件，可能还需要添加浓度为 4.5 g/L 的 (NH4)H2PO4（氮源）。溶于蒸馏水后进行高压灭菌。

关注F. venenatum 的生长

在大量培养出毒镰孢菌（F. venenatum）后，需要对其进行加工才能真正生产真菌蛋白。这方面仍需进一步研究，但可能包括过滤液体培养基以分离生物质，干燥生物质并加热以降低RNA含量，然后与其他一些成分（例如植物油、鸡蛋）混合。

参考文献